目的评价分析临床工作中分子诊断技术应用于病毒性呼吸道感染疾病诊断中的效果以及价值。方法2023年12月至2024年6月，以随机抽样法，选择4000例试验对象，均为呼吸道疾病患者，全部施予免疫荧光技术检测、实时荧光定量PCR技术检测、病毒培养分离技术检测。将病毒培养分离检测结果作为金标准，比较分析免疫荧光技术检测、实时荧光定量PCR技术检测诊断情况。结果实时荧光定量PCR技术检测耗时明显少于免疫荧光技术检测（P<0.05）；以病毒培养结果作为参照，免疫荧光技术检测准确率低于实时荧光定量PCR技术准确率（P<0.05）。结论应用实时荧光定量PCR技术检测诊断病毒性呼吸道感染疾病，耗时短，且诊断结果准确性高，对疾病早期诊断以及治疗可提供可靠且有效的诊断依据，应用价值高。