目的观察苏木精-伊红（HE）染色时间差异对组织切片染色质量的影响，探讨不同染色时间在组织学诊断中的适宜性，为病理实验室制片质量控制提供参考。方法选取2021年12月至2024年12月某三级医院病理科收集的300例手术及活检组织标本，常规石蜡切片后随机分为三组：A组（苏木精3min＋伊红30s，100例）、B组（苏木精5min＋伊红60s，100例）、C组（苏木精8min＋伊红90s，100例）。对比三组在细胞核染色清晰度、胞质着色均匀度、背景清晰度及切片总体合格率方面的差异，由两名高级职称病理医师采用盲法进行评价。结果B组细胞核染色清晰度［（4.57±0.32）分］、胞质着色均匀度［（4.55±0.38）分］及背景清晰度［（4.65±0.26）分］均显著高于A组［（3.89±0.43）分、（3.76±0.40）分、（4.13±0.37分）］和C组［（4.12±0.41）分、（4.08±0.39）分、（4.19±0.36）分］（P＜0.05）。切片总体合格率B组为95.00%（95/100），明显高于A组［78.00%（78/100）］和C组［82.00%（82/100）］（P＜0.05）。结论HE染色在B组常规时间范围内可获得最佳的组织学染色效果，过短或过长的染色时间均会降低核质分界和背景对比度，影响切片诊断价值。合理把握染色时间是提升病理切片质量和诊断准确性的关键。