目的探究地榆皂苷Ⅱ对膀胱癌细胞的抑制作用及其作用机制，从而为膀胱癌的治疗提供更安全有效的潜在天然药物及其治疗靶点。方法将网络药理学与体外实验相结合，首先，运用生物信息学方法筛选地榆皂苷Ⅱ和膀胱癌的相关靶点取其交集；其次，运用分子对接技术来验证地榆皂苷Ⅱ是否能与膀胱癌细胞的关键靶蛋白紧密结合，从而为其抗膀胱癌的分子机制研究提供重要依据；最后，通过体外实验检测地榆皂苷Ⅱ对膀胱癌细胞增殖和克隆形成的影响。结果整合网络药理学与体外实验发现，地榆皂苷Ⅱ能有效抑制膀胱癌细胞增殖并减少克隆形成，其作用机制可能与调控AKT1、JUN、MMP9等关键靶点蛋白的表达相关，生物信息学筛选与分子对接验证了地榆皂苷Ⅱ与这些靶蛋白的良好结合潜力，为开发膀胱癌天然药物提供了潜在候选物和作用靶点依据。结论地榆皂苷Ⅱ有效抑制膀胱癌细胞的生长增殖可能与AKT1、JUN、MMP9等蛋白表达相关。